Development of Three Real-Time PCR assays to Detect Bacillus anthracis and Assessment of Diagnostic Utility - Cox Victoria; Essex Lopresti Angela; Hartley Margaret G; Lukaszewski Roman A; Parsons Tanya M; Rachwal Phillip A; Stapleton Helen L; Weller Simon A; OMICS Publishing Group
Se desarrollaron tres ensayos de PCR en tiempo real para detectar objetivos genťicos de Bacillus anthracis (pXO1; pXO2 y cromosoma). Dos de los ensayos de PCR (pXO1-MGB y Ba chr-MGB) se probaron contra extractos de ADN producidos a partir de muestras de sangre completa obtenidas de un modelo de infeccin̤ murina de B. anthracis replicado. En los tres modelos, se analizaron 45 muestras en total, dentro de las cuales se demostr ̤que un subconjunto de 41 muestras contena̕ B. anthracis por PCR o cultivo microbiolg̤ico. Utilizando el cultivo microbiolg̤ico como un anl̀ogo del hemocultivo convencional (como se usa en entornos cln̕icos), se compararon las tasas de deteccin̤ de PCR y hemocultivo. En dos de los modelos murinos, el hemocultivo tuvo una tasa de deteccin̤ significativamente mayor que la PCR (BA1, p = 0.004; BA3, p = 0.013). En el modelo BA2 no hubo diferencias significativas entre las tasas de deteccin̤ de PCR y hemocultivo.Introduccin̤El ǹtrax es una enfermedad zoont̤ica causada por el Bacillus anthracis. Es un bacilo Gram positivo, no mv̤il, facultativo y formador de esporas anaerb̤icas. En los seres humanos se han registrado tres tipos de infeccin̤ por ǹtrax segn͠ la va̕ de infeccin̤: cutǹea, gastrointestinal y por inhalacin̤. El ǹtrax por inhalacin̤ es poco frecuente y suele ser inducido por la exposicin̤ a esporas, ya sea de fuentes ambientales [1] o por bioterrorismo [2]. Un reciente brote entre los consumidores de drogas en el Reino Unido se ha atribuido a la heron̕a contaminada con esporas de ǹtrax [3].La posibilidad de que B. anthracis se utilice como arma biolg̤ica significa que se requiere una identificacin̤ rp̀ida y sensible. El diagns̤tico rp̀ido del agente causante de una enfermedad permite aplicar las medidas mďicas adecuadas. El retraso en la aplicacin̤ de una terapia antimicrobiana apropiada [4] es un factor que contribuye al aumento de la mortalidad de los pacientes [5]. El diagns̤tico suele basarse en anl̀isis bacteriolg̤icos o serolg̤icos que pueden llevar mucho tiempo. En un caso reciente de carbunco por inhalacin̤ [1], el diagns̤tico preliminar de B. anthracis mediante tčnicas de hemocultivo se realiz ̤unas 72 horas despuš de que el paciente se presentara en el hospital.La reaccin̤ en cadena de la polimerasa (PCR) se usa comn͠mente para detectar muchos patg̤enos bacterianos de diferentes tipos de muestras [6,7] y puede lograr un resultado en 2 horas. La deteccin̤ de B. anthracis a menudo se facilita mediante ensayos de PCR diseądos contra objetivos genťicos en los pls̀midos pXO1 y pXO2 asociados a la virulencia. Sin embargo, estos pls̀midos (o los elementos que se originan en estos pls̀midos) se han encontrado en otras especies de Bacillus [8-10], de modo que la provisin̤ de un ensayo cromosm̤ico, especf̕ico para B. anthracis, puede ayudar a distinguir las cepas cls̀icas de B. anthracis de otras especies que albergan pXO1 y pXO2.