Extraccin̤ y ensayo de la actividad invertasa de levadura de panadera̕
La prc̀tica de extraccin̤ y ensayo consiste en llevar a cabo la extraccin̤ y ensayo de la actividad invertasa de levadura de panadera̕, utilizando como material de partida un preparado liofilizado de levadura comercializado por la casa Sigma. La velocidad de reaccin̤ se determinar ̀analizando la can...
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| Format: | Book |
| Language: | Spanish |
| Subjects: | |
| Online Access: | Extraccin̤ y ensayo de la actividad invertasa de levadura de panadera̕ |
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| Summary: | La prc̀tica de extraccin̤ y ensayo consiste en llevar a cabo la extraccin̤ y ensayo de la actividad invertasa de levadura de panadera̕, utilizando como material de partida un preparado liofilizado de levadura comercializado por la casa Sigma. La velocidad de reaccin̤ se determinar ̀analizando la cantidad de azc͠ares reductores formados (D-glucosa + D-fructosa, expresadas como equivalentes de glucosa) producida por unidad de tiempo y la actividad enzimt̀ica se expresar ̀como actividad especf̕ica (p.e. μkat mg-1 de proten̕a). A tal fin, la cantidad de azc͠ares reductores se determinar ̀colorimťricamente por el mťodo del c̀ido dinitrosalicl̕ico, y la cantidad de proten̕a presente en el extracto enzimt̀ico se analizar ̀por el mťodo de Bradford.En la prc̀tica de estudio cinťico se plantea realizar un estudio cinťico de la actividad invertasa, que comprender ̀la determinacin̤ de velocidades iniciales as ̕como estudios del efecto de los siguientes factores en la actividad enzimt̀ica: 1) concentracin̤ del enzima; 2) pH, con establecimiento del rango de valores de pH en el que el enzima es activo y determinacin̤ del pH p̤timo; 3) temperatura, con establecimiento del rango de valores de temperatura en el que el enzima es activo y determinacin̤ de la temperatura p̤tima, energa̕ de activacin̤ y valor del coeficiente de temperatura Q10; y 4) concentracin̤ de sustrato, con establecimiento del modelo cinťico (michaeliano o cooperativo) y determinacin̤ de los parm̀etros cinťicos del enzima. |
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